各類中藥制劑定性、定量分析：從合劑到注射劑的方法與實(shí)例！
?
?
中藥制劑由藥物細(xì)粉或藥物提取物加適宜輔料制成。由于多為復(fù)方，組成復(fù)雜，且?jiàn)A雜輔料干擾，除個(gè)別液體制劑外，大多取樣后需經(jīng)提取、分離、凈化才可進(jìn)行定性、定量分析。中藥制劑種類不同，所測(cè)成分不一，具體采用哪種提取分離凈化方法，需根據(jù)被測(cè)成分的化學(xué)性質(zhì)、劑型特點(diǎn)及干擾情況綜合決定。同一種成分在不同劑型或干擾條件下，提取分離凈化方法可能有所不同。本文以不同劑型的分析前提取分離凈化常用方法進(jìn)行介紹，測(cè)定方法則根據(jù)選定成分采用相應(yīng)方法分析。
一、合劑與口服液的分析與檢測(cè)
(一)合劑
合劑是指中藥材經(jīng)提取、濃縮制成的內(nèi)服液體劑型。其為水溶性液體制劑，含雜質(zhì)較多，或有一定黏稠度，或呈混懸液狀態(tài)，大多需凈化分離后進(jìn)行鑒別和測(cè)定。常用凈化方法包括：
液-液萃取法：可利用被測(cè)成分的酸堿性，將提取溶液調(diào)成堿性或酸性，以利于有效成分分離。
柱色譜法：如采用大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，再用乙醇洗脫，純化后以對(duì)照品進(jìn)行鑒別。
例如，涼解感冒合劑采用D101型大孔樹脂分離，以乙醇洗脫，以連翹苷為對(duì)照品進(jìn)行鑒別;含量測(cè)定則采用高效液相色譜法，在流動(dòng)相中加入緩沖溶液形成反離子色譜，避免分離中出現(xiàn)拖尾和強(qiáng)吸附現(xiàn)象。
實(shí)例：涼解感冒合劑
【處方】?魚腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹、金銀花
【性狀】?本品為棕色至棕褐色液體;氣微香，味甜、微苦澀。
【鑒別】
(1)取本品20mL，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1mL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(2)取本品3mL，加乙醇10mL，搖勻，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5～10mL，分別點(diǎn)于同一以4%醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(3)取本品用5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至11～12.用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取魚腥草對(duì)照藥材5g，加水100mL，煎煮30min，濾過(guò)，濾液用乙酸乙酯振搖提取，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1～2mL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-丙酮(15:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(4)取本品50mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次50mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇5mL使溶解，通過(guò)已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑為1cm，柱高為15cm)，用30%乙醇50mL洗脫，棄去洗脫液，繼以50%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取連翹苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各5mL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(17:2:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
【含量測(cè)定】?高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.2%磷酸溶液(52:48)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于2500.
(2)對(duì)照品溶液的制備 取在60℃真空干燥4h的黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。
(3)供試品溶液的制備 精密量取本品1mL，置50mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。
(4)測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每1mL含黃芩以黃芩苷(C??H??O??)計(jì)，不得少于1.5mg。
(二)口服液
口服液多數(shù)按注射劑工藝制成，雜質(zhì)含量相對(duì)較少，有些可直接進(jìn)行分析與檢測(cè)。若藥味較多、成分復(fù)雜時(shí)，仍需經(jīng)分離凈化后測(cè)定。分離、純化及凈化方法與合劑相同。先進(jìn)行必要的醇提取，以對(duì)照品為參照直接采用薄層鑒別。對(duì)含雜質(zhì)較多的物質(zhì)，可采用大孔樹脂或聚酰胺進(jìn)行分離，將分離物質(zhì)濃縮后以對(duì)照品進(jìn)行鑒定。含量測(cè)定方法與合劑基本相同，需注意在液相色譜分離中，流動(dòng)相加入的緩沖溶液應(yīng)在柱子耐受的pH范圍內(nèi)使用。
實(shí)例：健胃消食口服液
【處方】?太子參、陳皮、山藥、麥芽(炒)、山楂
【鑒別】
(1)取本品20mL，加乙醇56mL，搖勻，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液濃縮至近干，殘?jiān)?0%乙醇10mL使溶解，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取太子參對(duì)照藥材1g，加70%乙醇10mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2)取本品2mL，置D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，柱高15cm)，以水50mL洗脫，棄去水液;再用30%甲醇20mL洗脫，棄去洗脫液;繼用70%甲醇20mL洗脫，再用甲醇60mL洗脫，收集70%甲醇和甲醇洗脫液，濃縮至近10mL，移入10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁甲醇溶液，放置2.5h，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
【含量測(cè)定】?高效液相色譜法測(cè)定橙皮苷
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0)(20:80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000.
(2)對(duì)照品溶液的制備 取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，即得。
(3)供試品溶液的制備 精密量取本品15mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12h，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
(4)測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2mL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每1mL含陳皮以橙皮苷(C??H??O??)計(jì)，不得少于70μg。
二、中藥酒劑與酊劑的分析與檢測(cè)
酒劑是用白酒浸提藥材而制得的澄明液體制劑。酊劑系指藥材用不同濃度的藥用乙醇，經(jīng)浸提或溶解藥物而形成的澄明液體制劑。酒劑與酊劑的溶劑均含乙醇，蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)、樹膠等成分不溶于乙醇，故雜質(zhì)較少，澄明度好，特別適合含揮發(fā)性成分的藥物制劑。
酒劑和酊劑的含量測(cè)定大多需將樣品分離凈化后再進(jìn)行定量分析。最常用的凈化方法是將酒劑或酊劑加熱蒸去乙醇，再用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑提取，可去除較多雜質(zhì)。
當(dāng)被測(cè)成分為生物堿類時(shí)：蒸去乙醇后加堿(如氨水)堿化，再用有機(jī)溶劑提取。
當(dāng)被測(cè)成分為酸性成分時(shí)：可用堿水提取，再酸化后用有機(jī)溶劑提取凈化。
也可采用酸性染料與生物堿生成離子對(duì)后提取分離，或使用柱色譜法(如C??柱、氧化鋁柱、D-101大孔吸附樹脂柱等)進(jìn)行分離凈化。
所得樣品根據(jù)被測(cè)成分性質(zhì)，可采用多種分析方法進(jìn)行含量測(cè)定。
實(shí)例：三兩半藥酒
【處方】?當(dāng)歸、炙黃芪、牛膝、防風(fēng)
【鑒別】?取本品50mL置水浴上蒸至約30mL，放冷，用乙醚20mL，振搖提取，分次提取乙醚液，揮干，殘?jiān)屑尤霟o(wú)水乙醇1mL，使溶解，作為供試品溶液，另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.2g，加入乙醚3mL，浸泡1h，取上清液體作為對(duì)照藥材溶液，按照薄層色譜法中試驗(yàn)，吸取供試品溶液6μL、對(duì)照藥材溶液1～2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以正己烷-乙酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示同顏色的熒光斑點(diǎn)。
三、中藥注射劑的分析與檢測(cè)
中藥注射劑系指中藥材經(jīng)提取、精制后制成的供注入體內(nèi)的滅菌溶液，以及供臨床使用前配成溶液的無(wú)菌粉末。由于注射劑的特殊工藝要求，含雜質(zhì)較少，有些可直接作為供試品溶液。當(dāng)所含成分干擾較大，在所選方法下不能直接測(cè)定時(shí)，需經(jīng)分離凈化后方可進(jìn)行定量分析。
常用分離凈化方法與口服液相似，包括：
液-液萃取分離法：可利用被測(cè)成分的酸堿性，將溶液調(diào)至一定pH值以利于有效成分提出。
色譜法：如柱色譜法、薄層色譜法、紙色譜法等。
在分析時(shí)需注意注射劑中附加成分的干擾。注射劑常添加助溶劑、抗氧劑、抑菌劑等，例如以吐溫-80為助溶劑時(shí)，其與生物堿沉淀劑能產(chǎn)生沉淀，從而干擾生物堿類成分的分析。
實(shí)例：喘可治注射液
【處方】?淫羊藿、巴戟天
【性狀】?本品為淡黃色的澄明溶液。
【鑒別】?精密吸取本品1mL，轉(zhuǎn)入預(yù)先依次以甲醇、水各10mL洗脫備用的C??預(yù)處理小柱內(nèi)，依次用水、甲醇各10mL洗脫，取甲醇洗脫部分，濃縮至干。殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取【含量測(cè)定】項(xiàng)下淫羊藿苷的對(duì)照品儲(chǔ)備液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μL與對(duì)照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一以0.1mol/L磷酸氫二鈉、0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(1.3:1:1)10℃以下放置分層后的上層溶液為展開劑，展開，展距約8cm，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，105℃加熱數(shù)分鐘后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
【含量測(cè)定】?高效液相色譜法測(cè)定淫羊藿苷
(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-0.4%磷酸(55:45)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm;理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000.
(2)對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過(guò)夜的淫羊藿苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密吸取2mL，置10mL量瓶中，并用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。
(3)供試品溶液的制備 精密吸取本品1mL，置10mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。
(4)測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得。
本品每1mL含淫羊藿苷(C??H??O??)，不得少于0.48mg。
發(fā)布于: 2026-03-24